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dc.rights.licensehttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0
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dc.coverage.spatialColombiaspa
dc.creatorOrozco Mera, Martha Ilce
dc.creatorBernal Villegas, Jaime
dc.creatorHernández Fernández, Javier
dc.date.accessioned2020-09-02T22:57:30Z
dc.date.available2020-09-02T22:57:30Z
dc.date.created2009
dc.identifier.issn0123-3475spa
dc.identifier.otherhttp://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0123-34752012000100011&lang=esspa
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.12010/12635
dc.description.abstractSe estandarizó la técnica LSSP-PCR (reacción en cadena de la polimerasa con un único oligonucleótido en condiciones de baja astringencia), para identificar polimorfismos del gen cry1B en aislamientos nativos de Bacillus thuringiensis (Bt) . Se evaluaron 164 aislamientos nativos colombianos identificándose el gen cry1Ba en 11 de estos aislamientos. Los 11 fragmentos amplificados, junto con el de la cepa de referencia Bt subsp. aizawai HD137, se analizaron por LSSP-PCR y los patrones electroforéticos obtenidos se compararon cualitativamente. Con los productos amplificados mediante el oligonucleótido directo se construyó un dendrograma utilizando UPGMA que mostró tres agrupamientos con similitud de 83, 79 y 68%. La agrupación con 68% de similaridad correspondió al aislamiento nativo BtGC120 que presentó el patrón de bandas más variable. Con el oligonucleótido reverso el aislamiento BtGC120 mostró una menor variabilidad (43%). La secuencia nucleotidica obtenida de este fragmento de 806 pares de bases mostró una identidad de 93% con la secuencia de los genes cry1Bc1 de Bt morrisoni y cry1Bb1 de la cepa BT-EG5847. Se predijo del marco de lectura +3 una proteína de 268 residuos aminoácidicos, con 88% de identidad con la proteína Cry1Bc. Esta secuencia reveló dos dominios, una endotoxina N implicada en la formación del poro y otra endotoxina M relacionada en el reconocimiento del receptor. La evaluación biológica del aislamiento BtGC120 sobre larvas de primer instar del insecto plaga Spodoptera frugiperda, mostró una CL50 de 1,896 ng de proteína total por cm2. Este estudio muestra que la LSSP-PCR es una técnica que permite identificar de una manera específica variaciones en las secuencias de los genes cry de Bt, con potencialidad de encontrar nuevos genes con novedosas actividades biológicas.spa
dc.format.extent14 páginasspa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.language.isospaspa
dc.publisherRevista Colombiana de Biotecnologíaspa
dc.sourceinstname:Universidad Jorge Tadeo Lozanospa
dc.sourcereponame:Repositorio Institucional UJTLspa
dc.subjectBacillus thuringiensisspa
dc.subjectGenes cry1Bspa
dc.subjectDelta endotoxinasspa
dc.subjectSpodoptera frugiperdaspa
dc.subjectBTGC120spa
dc.titleLSSP-PCR para la identificación de polimorfismos en el gen cry1Ben cepas nativas de Bacillus thuringiensisspa
dc.title.alternativeLSSP-PCR to identify polymorphisms in the gene cry1B of Bacillus thuringiensis native strain
dc.type.localArtículospa
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccessspa
dc.type.hasversioninfo:eu-repo/semantics/acceptedVersion
dc.rights.localAbierto (Texto Completo)spa
dc.subject.keywordBacillus thuringiensisspa
dc.subject.keywordCry1B genesspa
dc.subject.keywordDelta-endotoxinsspa
dc.subject.keywordSodoptera frugiperdaspa
dc.identifier.repourlhttp://expeditiorepositorio.utadeo.edu.co
dc.description.abstractenglishLSSP-PCR (low stringency specific primer-PCR), technique was standardized for polymorphisms in native isolates cry1B genes Bacillus thuringiensis (Bt) identify. 164 isolates were evaluated by identifying the gene colombian native cry1Ba, in 11 of these isolates. The 11 amplified fragments, along with the reference strain Bt subsp. aizawai HD137 were analyzed by LSSP-PCR and electrophoretic patterns obtained were compared qualitatively. With the amplified products with direct oligonucleotide was constructed using UPGMA dendrogram showed three clusters with similarity of 83, 79 and 68%. The group with 68% similarity corresponded to the isolation BtGC 120 native who introduced the variable pattern of bands. With the isolation BtGC 120 reverse oligonucleotide showed less variability (43%). The nucleotide sequence obtained from this fragment of 806 bp showed 93% identity with the sequence of the genes of Bt morrisoni cry1Bc1 and cry1Bb1 BT-strain EG5847. Predicted reading frame of 268 +3 a protein amino acid residues with 88% identity with the protein Cry1Bc. This sequence revealed two domains, an N endotoxin involved in the formation of the pore and other related M endotoxin in receptor recognition. The biological evaluation BtGC120 insulation on first instar larvae of Spodoptera frugiperda insect pest, showed an LC50 of 1.896 ng of total protein per cm2. This study shows that the LSSP-PCR is a technique that identifies a specific way variation in the sequences of cry genes of Bt, with the potential to find new genes with novel biological activities.spa
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/resource_type/c_6501spa


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