Efecto de las proteínas recombinantes Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ba y Cry1Ca de Bacillus thuringiensis sobre larvas de Copitarsia decolora (Lepidoptera: Noctuidae)

Abstract

El objetivo de este estudio fue expresar y purificar las proteínas recombinantes (pR) Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ba y Cry1Ca a partir de cepas recombinantes de Escherichia coli y evaluar su efecto sobre larvas de primer instar de Copitarsia decolora. Las pRs se evaluaron en un bioensayo preliminar sobre larvas de C. decolora a una concentración de 4,8 µg de pR/ml. Se utilizó el método de contaminación superficial sobre hojas de astromelia (Alstromelia spp). En cada tratamiento se evaluó la mortalidad y la inhibición de crecimiento basado en la longitud y peso promedio larval. La electroforesis SDS-PAGE reveló bandas de proteínas con pesos moleculares esperados para las proteínas Cry1 de aproximadamente 135 kDa. La mortalidad larval no fue considerada como variable afectada por los tratamientos debido a que fue baja (entre 0 y 10%). La pRCry1Ab mostró el mayor efecto tóxico sobre la reducción en longitud (27%) y peso (40%) promedio larval (8,90 ± 1,88 mm y 10,23 mg) comparado con los controles negativos (agua: 12,27 ± 2,68 mm y 17,90 mg; y buffer: 12,10 ± 2,66 mm y 16,40 mg). Las pRCry1Aa y pRCry1Ca fueron moderadamente tóxicas y produjeron significativa inhibición del crecimiento en larvas de C. decolora (P<0,05). El menor efecto tóxico se observó con la pRCry1Ba (12,04 ± 2,25 mm y 15,96 mg) con un 1,19 y 7% de inhibición en longitud y peso, respectivamente. Un segundo bioensayo se realizó utilizando la pRCry1Ab y evaluando cinco concentraciones. Se observó inhibición de crecimiento en la longitud (de 18,6 a 6,70%) y en el peso larval (48 a 19,8%) a medida que se aumentó la concentración de cada tratamiento (P<0,05). El porcentaje de inhibición larval en las diferentes concentraciones empleadas con Bt. HD1 y pRCry1Ab fueron estadísticamente similares (P>0,05) ya que los valores de longitud y peso se traslaparon entre los tratamientos. Es importante evaluar el efecto de las proteínas Cry recombinantes empleadas en este estudio en concentraciones superiores a 307,2 µg/ml, y otras toxinas clivadas y activadas contra larvas de C. decolora.