Aislamiento y caracterización molecular y biológica de cepas nativas de bacillus thuringiensis para el control de tuta absoluta (meyrick: lepidoptera: gelechiidae), insecto plaga del tomate (lycopersicon esculentum)

Abstract

Se recolectaron 28 muestras de suelo en 14 municipios en Colombia. Se aislaron bacilos esporulados, que se caracterizaron microscópicamente cuantificando cristales. Los aislamientos positivos para cristales se sometieron a una caracterización bioquímica por medio de electroforesis de proteínas totales (SDS-PAGE). Las cepas positivas para la presencia de genes cry1 fueron sometidas a dos rondas de M-PCR con 2 mezclas de oligonucleótidos, reconociendo 6 genes específicos. Se aislaron 99 bacilos esporulados nativos que presentaron cristales con formas amorfas, bipiramidal, cuadradas, redondas y triangulares. Se observaron bacilos con 1, 2, 3 y 4 formas de cristal, estableciéndose 18 perfiles diferentes. Por SDS, se evidenciaron bandas de proteínas de 28 hasta 150 kDA clasificándose en 7 por su posible actividad biológica, lo que originó 28 perfiles diferentes. 35 bacilos esporulados presentaron genes cry1, y en estos, se detectaron por M-PCR los genes cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1B, cry1C y cry1D en el 76, 26, 21, 35, 32, y 8,8% respectivamente. De acuerdo a estas caracterizaciones se seleccionaron 10 aislamientos nativos como promisorios para el control de Tuta absoluta y se retaron contra larvas de 2do instar de este insecto plaga. Los bacilos nativos ZBUJTL39 y ZCUJTL11 presentaron una mejor actividad biológica que la cepa de referencia Bt var kurstaki HD1. El bacilo nativo ZCUJTL11 presentó una CL50 de 2,4 µg/ml (P<0,05). La metodología estandarizada selecciona las cepas de acuerdo a su actividad biológica potencial, como un paso previo a los ensayos biológicos, Este resultado es promisorio para posteriores investigaciones en ingeniería genética de tomate, para la obtención de cultivares autorresistentes a Tuta absoluta